趋化因子试剂盒在操作过程中的关键要点

更新时间：2025-07-29

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　　趋化因子试剂盒是一种用于检测趋化因子含量的专业工具，在生命科学研究和临床诊断中具有重要意义。趋化因子是一类能够引导细胞定向迁移的小细胞因子或信号蛋白，通过与趋化因子受体的结合，调控免疫细胞的迁移和定位，参与炎症反应、免疫应答和组织修复等生理过程。

　　趋化因子试剂盒基于酶联免疫吸附测定法（ELISA）等原理，利用双抗体夹心法等技术，能够特异性地检测样本中的趋化因子水平。试剂盒中通常包含固相抗体、酶标记抗体、标准品、显色底物等关键组分，通过一系列温育、洗涤和显色步骤，最终利用酶标仪测定吸光度，从而计算出样本中趋化因子的浓度。

　　趋化因子试剂盒在操作过程中的关键要点：

　　1、标准品稀释

　　冻干标准品需用说明书指定的稀释液（如样本稀释液）复溶，静置10~15分钟（避免剧烈震荡），确保完q溶解。

　　按梯度稀释标准品（如从高浓度到低浓度，依次为1000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL等），每一步稀释需充分混匀（用移液器吹吸5~10次），避免浓度梯度误差。

　　稀释后的标准品需在2小时内使用，未用完部分按保存要求处理（见“保存方法”）。

　　2、加样操作

　　酶标板布局：提前设计孔位（如标准品孔、样本孔、空白孔、对照孔），记录每孔对应的样本编号，避免混淆。

　　加样量精准：严格按照说明书要求加样（如标准品/样本50μL、检测抗体50μL等），加样时吸头尖d避免接触孔壁或液面，防止交叉污染；若有液体溅出，需用吸水纸吸干并消毒。

　　避免气泡：加样后若孔内出现气泡，需用吸头轻轻刺破，否则会干扰酶标仪读数。

　　3、孵育控制

　　温度与时间：孵育温度（如37℃或室温）和时间（如60分钟、90分钟）需严格遵循说明书，建议使用恒温孵育箱（避免用室温自然孵育，温度波动大），孵育时用封口膜密封酶标板，防止液体蒸发或污染。

　　避光孵育：若检测抗体或酶结合物对光敏感（如说明书标注），孵育时需用铝箔包裹酶标板。

　　4、洗涤步骤

　　洗涤是减少背景值的关键步骤，需使用稀释后的洗涤液，每孔加液量需充足（如300μL/孔），确保孔内液体完q覆盖包被面。

　　洗涤次数严格按说明书（通常4~6次），每次洗涤后需将酶标板在吸水纸上用力拍干（避免残留液体影响显色），但不可用力过猛导致孔内涂层脱落。

　　自动洗板机使用前需校准，手动洗板时避免洗涤液溢出至相邻孔。

　　5、显色与终止

　　显色液需现配现用（若为A、B液混合），加样后轻轻震荡酶标板（30秒），确保显色液均匀分布，然后避光孵育（如37℃、15~30分钟），密切观察显色情况（标准品孔应出现明显梯度颜色，空白孔无色或极浅）。

　　终止液（如2M H₂SO₄）具有腐蚀性，加样时需小心，按顺序逐孔加入（避免前后时间差过大），加完后轻轻混匀，此时颜色会由蓝变黄（若用TMB底物）。

　　终止后需在10~30分钟内用酶标仪读数，超过时间可能导致吸光度值下降。